對于cck8試劑的使用想必不少用戶還不知道如何正確的進(jìn)行操作，今天小編就告訴大家如何正確的操作cck8試劑吧
cck8試劑的操作說明
cck8試劑細(xì)胞活性檢測
1. 在96 孔板中接種細(xì)胞懸液 (100 ml /孔 ) 。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) (在37 ℃，5% CO2的條件下 )向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 O.D值的讀數(shù)) 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4小時(shí)。 4. 用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度 如果暫時(shí)不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
細(xì)胞增殖 -毒性檢測
1. 在96 孔板中配制 100 ml的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24小時(shí) ( 在37℃， 5% CO2的條件下 )向培養(yǎng)板加入10 ml不同濃度的待測物質(zhì)將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,12, 24 或48小時(shí) )向每孔加入10 ml cck8試劑 溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 O.D值的讀數(shù)) 。 5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4小時(shí)。 6. 用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。如果暫時(shí)不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。 注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 cck8試劑之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
cck8試劑制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
1. 先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。 2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。
3. 接種后培養(yǎng)2-4 小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加 cck8試劑試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測定 O.D值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo) (X軸) ，O.D值為縱坐標(biāo) (Y軸) 的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量 (使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 cck8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間)。
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